SABC免疫双染试剂盒(兔IgG，POD&DyLight488)

产品货号：

ZN1863

中文名称：

SABC免疫双染试剂盒(兔IgG，POD&DyLight488)

英文名称：

Concentrated SABC POD&DyLight488 IHC Kit(Rabbit IgG)

产品规格：

100T|200T|500T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒采用SABC-DyLight488荧光显色和SABC-POD酶促显色双显色原理，适用于一抗类型为兔IgG的免疫组化检测。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzyme Complex，故命名为SABC。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。免疫组化双显色试剂盒采用荧光素488+过氧化物酶POD标记的链酶亲和素（SABC-DyLight 488+POD）。DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料，由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度，更高的光学耐受性（抗淬灭性）和特异性，对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势，标记的抗体比Cy2和FITC标记的更亮，但背景更低。DyLight 488最大吸收峰493nm；最大发射峰518nm。呈黄绿色。加入显色底物DAB显示后，染色呈棕黄色。用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。

本试剂盒中各组分试剂为浓缩型，需稀释后使用，另有四个滴瓶供稀释试剂用。

产品组成

组分	100T	200T	500T	稀释比例
正常山羊血清封闭液	1mL	2mL	5mL	1:10
生物素化山羊抗兔IgG	0.1mL	0.2mL	0.5mL	1:100
SABC-DyLight488	0.1mL	0.2mL	0.5mL	1:200～800
SABC-POD(链霉亲和素-过氧化物酶复合物)	0.1mL	0.2mL	0.5mL	1:100

保存：4℃可保存一年，应避免冷冻。

自备试剂

粘片剂APES（ZN1946）或POLY-L-LYSINE（ZN1945）。
EDTA修复液（ZN1951）。
0.02M PBS（pH7.2～7.6）配法（ZN2950）：1000mL蒸馏水中加9克氯化钠，7克Na₂HPO₄·12H₂O，0.5克NaH₂PO₄·2H₂O。
0.01M枸橼酸盐缓冲液（ZN1955）：1000mL蒸馏水中加3克枸橼酸三钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O，0.4克枸橼酸(C₆H₈O₇·H₂O)。
DAB显色试剂盒（ZN2968）。

注：免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。

石蜡片热修复染色步骤：
- 石蜡切片，常规脱蜡至水。
- 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
- 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
- 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200～800)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- DAB显色：按照DAB显色试剂盒（ZN2968）说明书配好即用型DAB后加至标本切片上，显色1～10分钟左右，水洗。
- 根据需要用苏木素(ZN1971)复染。水溶性封片剂(ZN2946)封片。
- 荧光显微镜观察。
石蜡片酶消化染色步骤：
将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
石蜡切片酶不消化/修复程序：
对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
细胞片的染色步骤：
- 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
- 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
- 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(ZN2950)冲洗，5min×3次。
- 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
- 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
- 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200～800)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- DAB显色：按照DAB显色试剂盒（ZN2968）说明书配好即用型DAB后加至标本切片上，显色1～10分钟左右，水洗。
- 根据需要用苏木素(ZN1971)复染。水溶性封片剂(ZN2946)封片。
- 荧光显微镜观察。

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